抗体制备与使用实验指南

　　目录译者序前言第1章 抗体 11.1 一种多功能分子——抗体 11.2 相关伦理思考 31.3 实验室安全 41.4 手册编排 4参考文献 4第2章 抗原 52.1 抗原的选择 62.2 多肽抗原 62.2.1 多肽抗原的免疫进度表 72.3 蛋白质抗原 72.3.1 原核蛋白 82.3.2 真核蛋白 112.4 全细胞免疫原 122.4.1 全细胞免疫原的免疫方案 132.5 基因免疫 142.5.1 质粒DNA 142.5.2 腺病毒 16参考文献 17第3章 佐剂 203.1 引言 203.2 佐剂的使用 223.2.1 总体要求 223.2.2 弗氏佐剂的使用 233.2.3 TiterMax佐剂的使用方案 253.2.4 Ribi佐剂系统(RAS)的应用 263.2.5 CJerbu佐剂的应用 273.2.6 Imjcct铝盐佐剂的使用 27参考文献 28第4章 多克隆抗体制备 304.1 概要 304.2 抗原提呈细胞 304.2.1 B细胞的抗原识别 324.2.2 T细胞的抗原识别 324.2.3 B细胞受体和抗体产牛 344.2.4 免疫记忆 344.2.5 抗体 344.2.6 佐剂的作用 354.2.7 抗原特点 394.2.8 免疫途径 404.2.9 免疫步骤 444.2.10 物种选择 444.3 结论 48参考文献 48第5章 单克隆抗体的制备 555.1 引言 555.2 材料 565.2.1 免疫原 565.2.2 免疫用的动物 575.2.3 免疫策略 585.3 免疫程序 605.3.1 培养基和骨髓瘤细胞 605.3.2 免疫B细胞的制备 635.3.3 融合和铺板 635.3.4 筛选 655.3.5 业克隆和低温冻存 665.3.6 杂交瘤细胞的扩增 685.4 结论 69参考文献 70第6章 单克隆抗体的定量生产 726.1 引言：方法比较 726.2 抗体制备方法概况 726.2.1 产量 736.2.2 费用和设备 736.2.3 动物福利 736.2.4 免疫活性分子污染 746.2.5 微生物污染 746.2.6 抗体糖基化 756.3 腹水的制备 756.3.1 方法概述 756.3.2 免疫原同种异体反应性或异种抗原反应性的对策 766.3.3 体内制备方案：BALB／c小鼠腹水 776.3.4 体内单克隆抗体的制备：通过异种的杂交瘤细胞系制备腹水 806.4 细胞培养制备单克隆抗体 836.4.1 在研究实验室中体外制备单克隆抗体 836.4.2 实验方案：在CELLine CL-1000培养瓶中制备单克隆抗体 856.4.3 用重组和转基冈系统制备抗体 896.5 结论 89参考文献 89第7章 抗体的纯化和鉴定 947.1 引言 947.2 抗体纯化 947.2.1 通过沉淀进行部分纯化 957.2.2 蛋白质A和蛋白质G 977.2.3 IgM和FAB抗体片段的纯化 1037.3 抗体的鉴定 1077.3.1 区带（醋酸纤维）电泳 1077.3.2 通过280nm吸光度测定抗体浓度 1087.3.3 SDS—PAGE 1097.3.4 免疫印迹 1117.3.5 等电聚焦 1137.3.6 酶免疫分析 1147.4 结语 116参考文献 116第8章 细菌中制备抗体 1178.1 引言 1178.2 所需材料 1198.3 方法 1218.3.1 噬粒设计 1218.3.2 文库构建 1228.3.3 抗原特异性抗体的筛选 128参考文献 132第9章 抗体的化学和蛋白水解修饰 1369.1 引言 1369.2 J般步骤 1379.2.1 抗体溶液的稳定性 1379.2.2 抗体的定量 1389.2.3 抗体的浓缩和缓冲液置换 1409.3 胺类的修饰 1429.3.1 总体考虑 1429.3.2 胺反应试剂的分类 1449.3.3 NHS-PE04-BIOTIN的生物素化反应 1469.3.4 用荧光染料进行标记 1519.3.5 巯基的导入 1529.3.6 聚乙二醇化 1549.3.7 与螯合剂的偶合 1549.4 巯基和二硫键的修饰 1569.4.1 IgG的二硫键和巯基 1569.4.2 二硫化物的互换反应 1579.4.3 其他涉及巯基和二硫键的氧化还原试剂 1619.4.4 用卤代烃和N-烷基马来酰亚胺进行硫醇的烷基化 1629.5 碳水化合物修饰 1639.5.1 范例流程10：用)Jal04氧化IgG的碳水化合物部分 1649.5.2 范例流程11：DAVI)B酰肼与氧化型IgG的偶合 1659.6 抗体的同相化 1659.6.1 聚苯乙烯培养皿和ELISA孔的固相化 1659.6.2 与亲和介质的共价偶合 1669.6.3 经生物素介导与亲和介质的固相化 1689.7 蛋白的水解修饰 1709.7.1 木瓜蛋白酶水解兔IgG制备Fab片段 1729.8 抗体与其他蛋白质的交联 1779.8.1 范例流程18：肼与IgG氨基的交联 1789.8.2 范例流程19：醛与另一个蛋白质氨基的交联 1809.8.3 范例流程20：MEHN-IgG与FB-蛋白质的交联 181参考文献 182第10章 抗体的应用 18410.1 引言 18410.2 蛋白质转印 18510.2.1 转印设备 18510.2.2 转印缓冲液 18710.2.3 条件的优化 18710.2.4 转印膜 18710.3 检测 18910.3.1 蛋白质印迹的直接染色 18910.3.2 抗原的检测 18910.3.3 蛋白质免疫印迹的检测抗体 19010.3.4 免疫印迹实验中抗体的替代品 19110.3.5 蛋白质免疫印迹的定量 19210.3.6 相对分子质量标准品 19310.4 蛋白质免疫印迹实验的操作程序 19410.4.1 操作流程 19510.4.2 免疫印迹实验需要的溶液 19610.5 实验假象以及故障的诊断和排除 19810.6 抗体芯片 19810.7 临床应用 19910.8 免疫沉淀反应及其相关应用 20010.9 总结 201参考文献 202第11章 免疫组织化学法 20611.1 引言 20611.1.1 方法学概述 20611.1.2 对新的免疫组织化学方法进行标准化的一种实用方法 20611.1.3 免疫组织化学巾的抗体 20711.2 组织准备 20811.2.1 载玻片 20911.2.2 细胞涂片／离心细胞涂片制备 20911.2.3 冰冻切片 21011.2.4 石蜡切片 21011.2.5 细胞块 21111.3 酶标记 21111.3.1 辣根过氧化物酶 21211.3.2 碱性磷酸酶 21211.4 背景与非特异反应产生的原因 21211.4.1 内源性酶活性 21211.4.2 其他内源性物质活性 21311.4.3 一扰产牛的非特异结合反应或背景染色的原因 21311.4.4 疏水作用和离子相互作用产生的背景 21411.5 抗原修复技术(AR) 21511.5.1 去污剂和离液序列高的物质 21511.5.2 酶抗原修复法 21611.5.3 热诱导抗原决定簇修复(HIER) 21611.6 免疫酶技术 21811.6.1 直接法 21911.6.2 问接法 22011.6.3 多步法 22111.7 免疫荧光技术 22711.7.1 荧光染料 22711.7.2 间接免疫荧光技术 228附录 228A.1 免疫组织化学染色试剂 228A.1.1 内源性过氧化物酶封闭液 228A.1.2 内源性碱性磷酸酶封闭液 229A.1.3 非特异结合性封闭液 230A.1.4 内源性亲和素／生物素封闭液 230A.1.5 抗原修复缓冲液 231A.1.6 胰蛋白酶抗原修复溶液 231A.1.7 抗原修复中的蛋白酶 232A.1.8 抗原修复中的胃蛋白酶 232A.1.9 漂洗缓冲液TBS 500mmol/L，pH7.6 232A.1.10 磷酸盐缓冲液(PBS)，20mmol/L，pH7.0 233A.1.11 抗体稀释缓冲液 233A.1.12 底物及色原的制备 234参考文献 238第12章 免疫电子显微镜 23912.1 引言 23912.2 抗体 24012.2.1 一抗 24012.2.2 常见问题解析 24012.2.3 二抗 24112.2.4 试剂滴定 21112.2.5 非特异性背景染色 21212.2.6 对照 24312.3 标记物 24312.3.1 胶体金 24312.3.2 其他电子密度标记物 21512.3.3 晕金属标记物显色的故障诊断与排除 21512.3.4 多熏标记应用 24512.3.5 标记定量 24612.4 组织标记 24612.4.1 同定 21612.4.2 包埋前标记 21612.4.3 颗粒样本 24712.4.4 复型标记 24812.4.5 冷冻切片标记 24812.4.6 非冷冻组织包埋后标记 25012.6.7 冷冻置换 25112.5 与其他免疫显微镜的相关性 251参考文献 252第13章 流式细胞术 25613.1 引言 25613.1.1 现有技术 25613.1.2 抗体选择 25713.1.3 实验初始应考虑的因素 25713.1.4 对照 25813.1.5 特异性 25813.1.6 仪器显示和质量控制 25913.2 免疫分型 26013.2.1 抗体滴度测定 26013.2.2 直接标记法 26413.2.3 间接标记法 26613.2.4 胞内标记法 268参考文献 271第14章 酶联免疫吸附试验 272

　　《抗体制备与使用实验指南》收集了抗体制备与使用中的基本实验方法及相关的新科研进展，这些方法是开展抗体制备研究的必备知识，包括鼠源性单克隆抗体的制备、纯化、应用以及抗体的修饰等，同时也包括部分基因重组性单克隆抗体，涉及内容具体、全面，反映了国际上的新发展方向。