马克·吐温，1835年11月30日出生在美国密苏里州佛罗里达的乡村的贫穷律师家庭。他是家中7个小孩的第6个小孩。他只有两个兄弟姊妹可以在童年过后幸存下来，他的那两个兄弟姊妹就是哥哥奥利安·克列门斯（Orion Clemens）（1825年7月17日 - 1897年12月11日）和姊姊帕梅拉（Pamela）（1827年9月19日 - 1904年8月31日）。他的父亲是当地的律师，收入微薄，家境拮据。小塞缪尔上学时就不得不打工。他十二岁那年父亲去世，从此开始了独立的劳动生活，先在印刷所学徒，当过送报人和排字工，后来又在密西西比河上当水手和舵手。儿时生活的贫穷和长期的劳动生涯，不但为他以后的文学创作累积了素材，更铸就了一颗正义的心。他的母亲玛格丽特（Margaret）在他四岁时死去，而他的哥哥本杰明（Benjamin）（1832年6月8日 - 1842年5月12日）在三年后亦死去了。他的另一个哥哥Pleasant（1828年 - 1829年）只活到吐温出生前三个月。继这班年龄较马克·吐温大的兄弟姊妹之后，吐温又有一个弟弟－－亨利·克列门斯（Henry Clemens）（1838年7月13日 - 1858年6月21日）。在吐温4岁时，他们一家迁往密苏里州汉尼拔（Hannibal）的一个密西西比河的港市，而这就成为了他后来的著作《汤姆·索亚历险记》和《顽童流浪记》中圣彼得堡的城市的灵感。 那时，密苏里州是联邦的奴隶州，而年轻的吐温开始了解奴隶制，这成为了往后在他的历险小说中的主题。
马克·吐温是色盲的，而这激起了他在社交圈子的诙谐玩笑。1847年3月，当吐温11岁时，他的父亲死于肺炎。接着的那一年，他成为一名印刷学徒。1851年，他成为一名排字工人，也有投稿，并开始给他哥哥奥利安创办的《汉尼拔杂志》（Hannibal Journal）写草稿。在他18岁时，他离开汉尼拔并在纽约市、费城、圣路易和辛辛那提市都当过印刷工人。22岁时，吐温回到密苏里州。在下密西西比河到纽奥良的旅途中，轮船的领航员“碧士比”要吐温终身成为轮船领航员，而这职业是当时全美国薪资第三高的职业，每月250美元（等于现在的155，000美元/每年）。
由于那时的轮船是由很易燃的木材建造，因此在晚间亦不可以开灯。领航员需要对不断改变的河流有丰富的认识，因而可以避开河岸成百的港口和植林地。吐温在他得到领航员执照（1859年）之前花了2年多一丝不苟地研究了密西西比河的2000米。在得到执照前的训练期间，吐温说服他的弟弟亨利·克列门斯与他在密西西比河上工作。亨利死于1858年6月21日，那是由于亨利工作的那艘轮船爆炸。吐温为此感到极内疚，并在余生中一直觉得他自己需负上责任。可是他继续在河上工作并一直是领航员，直到1861年南北战争爆发而缩减了密西西比河的交通。
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