生物文库技术：噬菌体展示与SELEX技术

　　上篇 噬菌体表面展示技术原理及其操作指南
　　第1章 概述
　　一、噬菌体表面展示随机肽库
　　二、噬菌体抗体库
　　三、噬菌体表面展示技术筛选原理和基本方法
　　四、噬菌体表面展示技术的应用
　　第2章 噬菌体表面展示肽库技术操作指南
　　一、试剂
　　二、实验步骤
　　三、影响筛选的因素
　　四、结果判断和分析
　　第3章 噬菌体肽库构建及筛选实例
　　实例1基于昆虫防御素A蛋白分子的噬菌体展示构象肽库的构建
　　实例2重组hTNF-a结合肽的筛选
　　实例3马抗SARS-CoV多抗抗原表位的筛选
　　第4章 噬菌体抗体库技术操作指南
　　一、试剂
　　二、实验步骤
　　三、影响筛选的因素
　　第5章 噬菌体抗体库构建及筛选实例
　　一、引物
　　二、淋巴细胞总RNA的提取及VH和VL基因的扩增
　　三、初级噬菌体抗体库的构建
　　四、通过Cre-loxP位点特异性重组构建大容量噬菌体抗体库
　　五、噬菌体抗体库的筛选
　　六、噬菌体抗体的鉴定及序列分析
　　下篇 SELEX技术原理及其操作指南
　　第1章 概述
　　一、SELEX技术的基本技术路线
　　二、SELEX筛选的特点
　　三、SELEX的应用
　　四、适配子的改造
　　第2章 SELEX技术操作指南
　　一、试剂与设备
　　二、文库／文库模板和引物的设计与合成
　　三、RNA文库的获得（PCR、体外转录与RNA回收）
　　四、文库与靶分子孵育
　　五、结合寡核苷酸分子的分离
　　六、反转录
　　七、PCR
　　八、下一轮筛选用文库的制备
　　九、重复筛选
　　十、筛选后获得的特异aptamer的分析
　　第3章 SELEX技术筛选实例
　　实例1 牛凝血酶特异的RNA aptamer的筛选
　　实例2 CE-SELEX筛选技术
　　实例3 亲和层析SELEX筛选促红细胞生成素适配体及基于分子信标检测方法的建立
　　实例4 亲和层析SELEX筛选相思子毒素适配体及其在分析检测中的应用
　　实例5 以完整细胞为靶的消减SELEX筛选
　　实例6 肿瘤组织切片-SELEX技术筛选临床标本分子探针
　　实例7 组合aptamer用于金黄色葡萄球菌检测的研究

　　    噬菌体展示技术和SELEX技术是生物文库技术中最常用的两种技术。
　　    噬菌体展示技术是将外源蛋白的基因型与表型联系在一起，通过筛选可以将展示特异性外源蛋白多肽的噬菌体从表达有各种外源蛋白的噬菌体库中筛选出来，经扩增可以得到上千倍乃至108倍的富集。获得的靶（分）子特异结合肽在拮抗肽筛选、抗体抗原表位鉴定方面十分有用。
　　    SELEX技术是应用大容量的人工合成随机寡核苷酸库，结合PCR体外扩增技术，以指数级富集与靶（分）子特异结合的寡核苷酸适配体（aptamer）的方法。由于获得的aptamer具有高特异性、高亲和力，在特异分子标志物筛选及靶标发现方面具有独到优势。目前，噬菌体展示和SELEX技术已经广泛应用于基础研究、药物筛选、疫苗及诊断试剂的研制等方面，具有很好的应用前景。
　　    《生物文库技术：噬菌体展示与SELEX技术》作者经过多年努力，建立和改良了多种噬菌体展示和SELEX技术平台，并利用上述技术平台开展了针对感染、炎症、肿瘤和生物毒素等方面的新型诊断或治疗药物以及基础方面的研究，取得了良好的结果。此书是根据作者实际工作经验，结合具体筛选实例编写而成，特别编入作者的经验借鉴与注意事项，为读者提供了较详尽的参考技术路线和具体操作方法，尽量使具有一定生物化学和分子生物学实验基础的科技人员能够快速掌握噬茵体展示和SELEX技术。