动物细胞培养——基本技术和特殊应用指南（原书第六版）
《动物细胞培养——基本技术和特殊应用指南》历来被看作该领域的经典与领衔工作。本版除保留前五版的基本内容（如原代培养、细胞系、传代、分化、细胞特化、污染、无菌技术、细胞毒性、冷冻保存、实验室布局与设备培训纲要等）之外，为反映组织工程与再生医学发展的需要，特地增加了“干细胞”一章，以及某些新的特殊技术。内容新颖，程序可靠。极具参考与模仿价值。
译者的话
前言与致谢
缩略语
图片目录
彩版目录
方案目录
第1章 绪论 1
1.1 历史背景 1
1.2 组织培养的优点 7
1.2.1 环境控制 7
1.2.2 样品的特征和均一性 8
1.2.3 经济、规模和机械化 8
1.2.4 体内环境的体外模拟 8
1.3 局限性 9
1.3.1 专业技能 9
1.3.2 量的问题 9
1.3.3 去分化和选择 10
1.3.4 细胞的起源 10
1.3.5 不稳定性 10
1.4 体外的主要差异 10
1.5 组织培养的类型 11
第2章 培养细胞的生物学 14
2.1 培养细胞的环境 14
2.2 细胞黏附 14
2.2.1 细胞黏附分子 15
2.2.2 细胞间连接 16
2.2.3 细胞外基质 16
2.2.4 细胞骨架 18
2.2.5 细胞迁移 18
2.3 细胞增殖 18
2.3.1 细胞周期 18
2.3.2 细胞增殖的调控 19
2.4 细胞分化 20
2.4.1 细胞分化的维持 21
2.4.2 细胞去分化 21
2.5 细胞信号传递 24
2.6 能量代谢 25
2.7 培养细胞的起源 26
2.7.1 培养的开始 26
2.7.2 细胞系的演化 27
2.7.3 细胞的衰老 28
2.7.4 连续细胞系的转化与形成 28
第3章 实验室设计、布局及设备 30
3.1 布局、规划和服务设施 30
3.1.1 要求 32
3.1.2 服务设施 34
3.1.3 通风装置 35
3.2 布局 35
3.2.1 无菌操作区 36
3.2.2 层流原理 36
3.2.3 工作台 36
3.2.4 检疫室和防范室 36
3.2.5 培养 37
3.2.6 准备区 40
3.2.7 储存 41
第4章 设备及材料 44
4.1 组织培养实验室的要求 44
4.2 无菌区 46
4.2.1 洁净台 46
4.2.2 手推车 48
4.2.3 无菌液操作——移液和分装 49
4.2.4 倒置显微镜 53
4.2.5 CCD摄像机和监视器 54
4.2.6 解剖显微镜 54
4.2.7 离心机 54
4.2.8 细胞计数 55
4.3 细胞孵育和培养 55
4.3.1 恒温箱 55
4.3.2 湿式CO2培养箱 56
4.3.3 温度记录仪 57
4.3.4 滚动架 57
4.3.5 磁力搅拌器 58
4.3.6 培养器皿 58
4.4 实验准备和杀菌 58
4.4.1 清洗 58
4.4.2 培养基和试剂的制备 59
4.4.3 杀菌 61
4.5 储存 63
4.5.1 消耗品 63
4.5.2 冰箱和冷冻箱 63
4.5.3 冷藏器 64
4.5.4 可控速率冷冻箱 64
4.6 附属设备 64
4.6.1 计算机和网络 64
4.6.2 普通正置显微镜 65
4.6.3 低温冷冻箱 65
4.6.4 共聚焦显微镜 65
4.6.5 PCR循环仪 65
4.7 专用设备 66
4.7.1 显微注射装置 66
4.7.2 集落计数器 66
4.7.3 可离心淘洗机 66
4.7.4 流式细胞仪 66
第5章 无菌技术 67
5.1 无菌技术的目标 67
5.1.1 微生物污染的风险 67
5.1.2 无菌的维持 67
5.2 创造无菌环境的各种因素 68
5.2.1 层流 69
5.2.2 安静的工作区域 71
5.2.3 工作面 71
5.2.4 个人卫生 73
5.2.5 试剂和培养基 73
5.2.6 培养物 73
5.3 灭菌操作 73
5.3.1 擦拭 73
5.3.2 加盖 74
5.3.3 灼烧 74
5.3.4 试剂瓶和培养瓶的操作 74
5.3.5 移液 75
5.3.6 液体倾倒 75
5.4 标准操作程序 76
5.5 仪器和设备 82
5.5.1 培养箱 82
5.5.2 盒装培养物 82
5.5.3 充入CO2气体 82
第6章 安全性、生物伦理及验证 83
6.1 实验室安全 83
6.2 危险性评估 83
6.3 标准操作程序 85
6.4 安全规则 85
6.5 常规安全 86
6.5.1 操作者 87
6.5.2 设备 87
6.5.3 玻璃器皿和锐利物品 87
6.5.4 化学毒性 88
6.5.5 气体 89
6.5.6 液氮 89
6.5.7 灼烧 90
6.6 火 90
6.7 放射性 91
6.7.1 摄入 91
6.7.2 放射性废弃物的处理 91
6.7.3 标记的试剂 91
6.7.4 高能源 91
6.8 生物危害性 92
6.8.1 生物防范水平 92
6.8.2 微生物学安全通风橱（MSC） 94
6.8.3 人体活检材料 96
6.8.4 遗传操作 97
6.8.5 生物危害性废弃物处理 97
6.8.6 熏蒸 97
6.9 生物伦理 98
6.9.1 动物组织 98
6.9.2 人体组织材料 98
6.10 质量保证 99
6.10.1 操作程序 100
6.10.2 质量控制（QC） 100
6.11 验证 100
6.11.1 鉴定 100
6.11.2 来源 101
6.11.3 污染 101
第7章 培养器皿和附着物 102
7.1 附着物 102
7.1.1 细胞的附着和生长 102
7.1.2 常见的附着材料 102
7.1.3 其他替代性附着物 103
7.2 表面处理 103
7.2.1 基质覆盖 103
7.2.2 饲养层 105
7.2.3 非黏附性附着面 106
7.3 培养器皿的选择 107
7.3.1 细胞产量 107
7.3.2 悬浮培养 109
7.3.3 通风 110
7.3.4 取样和分析 111
7.3.5 不均匀生长 112
7.3.6 价格 112
7.4 特殊系统 112
7.4.1 渗透性支持物 112
7.4.2 三维基质 113
第8章 成分明确培养基及补充物 115
8.1 培养基的发展史 115
8.2 物理化学特征 115
8.2.1 pH 115
8.2.2 CO2和碳酸盐 116
8.2.3 缓冲作用 123
8.2.4 氧气 123
8.2.5 渗透压 124
8.2.6 温度 124
8.2.7 黏滞度 125
8.2.8 表面张力和成泡性 125
8.3 平衡盐溶液 126
8.4 完全培养基 126
8.4.1 氨基酸 127
8.4.2 维生素 127
8.4.3 盐类 127
8.4.4 葡萄糖 128
8.4.5 有机补充物 128
8.4.6 激素和生长因子 128
8.4.7 抗生素 128
8.5 血清 129
8.5.1 蛋白质 130
8.5.2 生长因子 131
8.5.3 激素 131
8.5.4 营养物及代谢物 132
8.5.5 脂类 132
8.5.6 矿物质 132
8.5.7 抑制物 132
8.6 培养基和血清的选择 132
8.6.1 批次预约 134
8.6.2 血清的测试 135
8.6.3 热灭活 135
8.7 其他添加物 136
8.7.1 氨基酸水解物 136
8.7.2 胚胎浸出液 136
8.7.3 适应性培养基 136
第9章 无血清培养基 137
9.1 血清的缺点 145
9.2 无血清培养基的优点 146
9.2.1 标准培养基的定义 146
9.2.2 选择性培养基 146
9.2.3 调节细胞增殖与分化 146
9.3 无血清培养基的缺点 146
9.4 血清的替代 147
9.4.1 无血清培养基的商业供应 147
9.4.2 血清替代物 147
9.4.3 无血清传代培养 148
9.4.4 激素 149
9.4.5 生长因子 149
9.4.6 血清中的营养物质 154
9.4.7 蛋白质和多聚胺 154
9.4.8 黏滞度 154
9.5 无血清培养基的选择 154
9.5.1 细胞或产物特异性 154
9.5.2 适应无血清培养基 157
9.6 无血清培养基的研发 157
9.7 无血清培养基的制备 157
9.8 无动物蛋白培养基 158
9.9 小结 158
第10章 准备与灭菌 159
10.1 准备试剂与用品 159
10.2 设备与液体的灭菌 159
10.3 设备 162
10.3.1 玻璃器皿 162
10.3.2 玻璃移液管 165
10.3.3 螺口盖 168
10.3.4 清洁剂的选择 170
10.3.5 种类繁杂的设备 170
10.3.6 可重复使用的灭菌过滤器 171
10.4 试剂与培养基 173
10.4.1 水 173
10.4.2 纯水器的维护 175
10.4.3 平衡盐溶液 175
10.4.4 培养基的配制与灭菌 177
10.4.5 干粉培养基 180
10.4.6 特制培养基 182
10.5 培养基的灭菌 183
10.5.1 可高压灭菌的培养基 183
10.5.2 除菌过滤 183
10.5.3 血清 192
10.5.4 其他试剂的准备与灭菌 195
10.6 培养基的质控、检测和储存 196
10.6.1 质量控制 196
10.6.2 无菌检测 196
10.6.3 培养物检测 197
10.6.4 储存 197
第11章 原代培养 199
11.1 原代培养入门 199
11.1.1 用于解离组织的酶 199
11.1.2 解离过程的共同特点 200
11.2 组织分离 200
11.2.1 小鼠胚胎 200
11.2.2 鸡胚 204
11.2.3 人体活检材料 206
11.3 原代培养的类型 207
11.3.1 原代外植 207
11.3.2 酶的解离作用 210
11.3.3 温胰蛋白酶消化 210
11.3.4 低温预处理的胰蛋白酶消化 213
11.3.5 鸡胚器官原基 216
11.3.6 其他酶解过程 219
11.3.7 胶原酶 220
11.3.8 机械法解离 222
11.3.9 分离活细胞 224
11.3.10 原代培养小结 225
11.3.11 原始记录 225
第12章 传代培养和细胞系 227
12.1 传代培养和扩增 227
12.1.1 交叉污染和鉴定错误 229
12.1.2 支原体污染 231
12.1.3 术语定义 231
12.1.4 细胞系的命名 232
12.1.5 培养物的年龄 233
12.2 选择细胞系 233
12.3 常规培养 234
12.3.1 细胞形态的意义 234
12.3.2 培养基的更换 235
12.3.3 标准的换液方案 236
12.4 传代 238
12.4.1 传代标准 240
12.4.2 单层生长细胞典型的传代方案 241
12.4.3 生长周期和传代比率 243
12.4.4 传代时的细胞浓度 245
12.4.5 悬浮培养细胞的扩增 245
12.4.6 悬浮生长细胞的传代 246
12.4.7 培养条件的标准化 248
12.4.8 抗生素的使用 248
12.4.9 培养记录 249
第13章 克隆培养及筛选 251
13.1 克隆培养 251
13.2 贴壁率的刺激 255
13.2.1 促进克隆生长的条件 255
13.2.2 条件培养基 256
13.2.3 饲养层细胞 257
13.3 悬浮克隆培养 259
13.4 细胞克隆的分离 264
13.4.1 单层贴壁细胞克隆的其他分离技术 267
13.4.2 悬浮细胞克隆 268
13.5 复制性培养 269
13.6 选择性抑制剂 269
13.7 遗传变异细胞的筛选 270
13.8 细胞与基质的相互作用 272
13.8.1 选择性黏附 272
13.8.2 选择性脱壁 272
13.8.3 基质性质 273
13.8.4 选择性饲养层 273
13.8.5 半固体培养基选择 273
第14章 细胞分离 275
14.1 细胞密度及等密度沉降法 275
14.2 细胞体积与沉降速率 279
14.2.1 单位重力沉降 279
14.2.2 离心淘洗分离技术 279
14.3 以抗体为基础的分离技术 280
14.3.1 免疫盘化法 281
14.3.2 免疫磁珠分选 281
14.4 荧光活化的细胞分选法 284
14.5 其他分离技术 285
14.6 初学者如何进行细胞分离实践 286
第15章 细胞鉴定 287
15.1 鉴定的需求 287
15.2 真实性验证 287
15.3 保存记录和身世 288
15.4 鉴定指标 288
15.4.1 种属鉴定 289
15.4.2 谱系或组织标记 289
15.4.3 独特标记物 291
15.4.4 转化 291
15.5 细胞形态学 291
15.5.1 显微镜使用 295
15.5.2 染色 297
15.5.3 细胞学检查所用培养器皿：单层
培养 299
15.5.4 悬浮细胞细胞学检查标本的制备 299
15.5.5 光学显微照相技术 302
15.6 共聚焦显微镜 303
15.7 染色体分析 303
15.7.1 染色体显带技术 306
15.7.2 染色体分析 307
15.8 DNA含量 308
15.8.1 DNA杂交 308
15.8.2 DNA指纹技术 308
15.8.3 DNA绘谱 309
15.9 RNA和蛋白质 314
15.10 酶活性 314
15.10.1 同工酶 314
15.10.2 利用Authentikit进行同工酶电泳 315
15.11 抗原标记 318
15.11.1 免疫染色 320
15.11.2 免疫分析 321
15.12 分化 322
第16章 分化 323
16.1 体内表型的表达 323
16.1.1 去分化 323
16.1.2 细胞谱系选择 324
16.2 分化阶段 324
16.3 增殖和分化 324
16.4 定向和细胞谱系 325
16.5 干细胞可塑性 326
16.6 分化标记物 327
16.7 诱导分化 328
16.7.1 细胞相互作用 328
16.7.2 全身性因子 330
16.7.3 细胞-基质相互作用 333
16.7.4 极性和细胞形状 334
16.7.5 氧张力 334
16.8 分化和恶性 334
16.9 应用 334
第17章 转化和永生化 336
17.1 在细胞系鉴定中的作用 337
17.2 什么是转化 337
17.3 遗传不稳定性和异质性 338
17.3.1 遗传不稳定性 338
17.3.2 染色体畸变 339
17.4 永生化 339
17.4.1 衰老的控制 340
17.4.2 病毒基因致永生化 341
17.4.3 人成纤维细胞的永生化 342
17.4.4 端粒酶诱导的永生化 345
17.4.5 淋巴细胞永生化 350
17.4.6 转基因鼠 350
17.5 生长控制异常 350
17.5.1 停泊不依赖性 350
17.5.2 接触抑制 351
17.5.3 血清依赖 353
17.5.4 癌基因 354
17.6 致瘤性 354
17.6.1 恶性化 354
17.6.2 肿瘤移植 355
17.6.3 侵袭力 355
17.6.4 血管发生 356
17.6.5 纤溶酶原活化因子 359
第18章 污染 361
18.1 污染的来源 361
18.1.1 操作者的技术 363
18.1.2 环境 364
18.1.3 层流通风橱的使用和维护 364
18.1.4 湿度恒温箱 364
18.1.5 冷藏库 365
18.1.6 无菌材料 366
18.1.7 引入的细胞系和活组织 366
18.1.8 隔离 366
18.2 微生物污染的种类 366
18.3 污染物的监控 366
18.3.1 可见的微生物污染 367
18.3.2 支原体 368
18.3.3 支原体的荧光染色 369
18.3.4 PCR法检测支原体 370
18.3.5 检测支原体的替代方法 374
18.3.6 支原体检测服务 375
18.3.7 病毒污染 375
18.4 污染培养物的处理 375
18.5 污染的去除 376
18.5.1 细菌、真菌和酵母菌 376
18.5.2 支原体的消除 377
18.5.3 清除病毒污染 378
18.5.4 顽固污染 379
18.6 交叉污染 379
18.7 结论 380
第19章 冻存 381
19.1 冻存的意义 381
19.2 冻存前注意事项 381
19.2.1 鉴定 382
19.2.2 何时冻存 382
19.3 冻存细则 382
19.3.1 细胞冻存的理论背景 382
19.3.2 细胞浓度 382
19.3.3 冻存液 383
19.3.4 冷却速度 383
19.3.5 安瓿 386
19.3.6 低温冰箱 386
19.3.7 培养细胞的冻存 389
19.3.8 冻存记录 391
19.3.9 安瓿的解冻 392
19.3.10 培养瓶冻存 394
19.4 玻璃化保存 394
19.4.1 hES细胞的冻存 394
19.4.2 hES细胞解冻 397
19.5 冻存库的设计和监控 398
19.5.1 冻存管理 399
19.5.2 细胞库存的连续更换 399
19.6 细胞库 400
19.7 细胞的运输 400
19.7.1 冻存安瓿 401
19.7.2 活细胞 401
第20章 定量 403
20.1 细胞计数 403
20.1.1 血细胞计数器 404
20.1.2 电子计数 407
20.1.3 染色的单层细胞 411
20.1.4 流式细胞仪 411
20.2 细胞质量 413
20.3 DNA含量 413
20.4 蛋白质 414
20.4.1 样品的溶解性 414
20.4.2 Bradford分析 414
20.5 合成速率 415
20.5.1 DNA合成 415
20.5.2 蛋白质合成 417
20.6 准备样品用于酶分析和免疫分析 418
20.7 细胞计数 419
20.7.1 原位标记 419
20.7.2 流式细胞术 419
20.8 重复取样 419
20.8.1 数据获得 419
20.8.2 数据分析 420
20.9 细胞增殖 420
20.9.1 实验设计 421
20.9.2 生长周期 421
20.9.3 单层细胞生长曲线的分析 425
20.9.4 培养基体积，细胞浓度和细胞密度 427
20.9.5 悬浮培养 428
20.9.6 生长周期的各个阶段 429
20.9.7 生长曲线的衍生物 430
20.10 贴壁效率 431
20.10.1 集落形成分析 433
20.10.2 自动集落计数 434
20.11 标记指数 434
20.11.1 生长分数 437
20.11.2 有丝分裂指数 438
20.11.3 分裂指数 438
20.12 细胞周期时间 438
20.13 细胞迁移 438
第21章 细胞毒性 439
21.1 活性、毒性和存活 439
21.2 体外局限性 440
21.2.1 药物代谢动力学 440
21.2.2 新陈代谢 440
21.2.3 组织和全身反应 440
21.3 分析的性质 440
21.3.1 生存力 441
21.3.2 存活 443
21.3.3 细胞增殖测定 448
21.3.4 代谢性细胞毒性测定 448
21.3.5 微滴定实验 449
21.3.6 微滴定与克隆存活的比较 453
21.3.7 药物的相互作用 454
21.4 细胞毒性实验的应用 454
21.4.1 抗癌药物筛选 454
21.4.2 肿瘤药物的前瞻性实验 454
21.4.3 药物学实验 455
21.5 基因毒性 455
21.5.1 姐妹染色单体交换的诱变实验 455
21.5.2 致癌性 458
21.6 炎症反应 459
第22章 特殊类型细胞的培养 461
22.1 特殊细胞培养技术 463
22.2 上皮细胞 463
22.2.1 表皮 464
22.2.2 角膜 469
22.2.3 乳腺 471
22.2.4 子宫颈 473
22.2.5 胃肠道 476
22.2.6 肝 478
22.2.7 原代肝细胞培养 478
22.2.8 人肝癌细胞系HepaRG 481
22.2.9 胰 483
22.2.10 肾 485
22.2.11 气管和支气管上皮 487
22.2.12 口腔上皮 489
22.2.13 前列腺 490
22.3 间充质细胞 492
22.3.1 结缔组织 493
22.3.2 脂肪组织 493
22.3.3 肌 495
22.3.4 软骨 501
22.3.5 骨 504
22.3.6 内皮细胞 506
22.4 神经外胚层细胞 512
22.4.1 神经细胞 512
22.4.2 神经胶质细胞 513
22.4.3 内分泌细胞 519
22.4.4 黑素细胞 520
22.5 造血细胞 523
22.6 生殖腺 524
22.6.1 卵巢 524
22.6.2 睾丸 524
第23章 干细胞、生殖细胞和羊水细胞 525
23.1 干细胞 525
23.1.1 胚胎干细胞 525
23.1.2 小鼠胚胎干细胞的诱导 525
23.1.3 小鼠胚胎干细胞的传代培养和扩增 530
23.1.4 人胚胎干细胞的原代培养 532
23.1.5 hES细胞的传代 534
23.1.6 鱼胚胎来源的多能干细胞 535
23.2 生殖细胞 539
23.3 胚外细胞 540
23.3.1 羊水细胞的培养 540
23.3.2 从新生儿或青年来源的细胞 544
23.3.3 成人来源的多能干细胞 544
23.3.4 人骨髓来源间充质干细胞 545
23.3.5 诱导多潜能干细胞 548
23.3.6 小鼠骨髓长期培养 552
23.3.7 人原始造血细胞长期培养 554
23.3.8 造血细胞集落形成分析 559
第24章 肿瘤细胞培养 562
24.1 肿瘤细胞培养中的问题 562
24.2 取材 563
24.2.1 代表性细胞的选择 563
24.2.2 冷冻组织保存 564
24.3 分离 564
24.4 原代培养 565
24.5 肿瘤细胞的选择培养 566
24.5.1 选择培养基 566
24.5.2 汇合饲养层 566
24.5.3 悬浮克隆 569
24.5.4 异种移植 569
24.6 细胞系的建立 570
24.6.1 原代肿瘤培养物的传代 570
24.6.2 连续细胞系 570
24.7 肿瘤细胞培养物的特征 571
24.7.1 肿瘤细胞的异质性 571
24.7.2 组织型培养 572
24.8 特殊类型肿瘤 572
24.8.1 乳腺 572
24.8.2 肺 574
24.8.3 胃 575
24.8.4 结肠 575
24.8.5 胰腺 578
24.8.6 卵巢 578
24.8.7 前列腺 578
24.8.8 膀胱 579
24.8.9 皮肤 579
24.8.10 子宫颈 580
24.8.11 胶质细胞瘤 580
24.8.12 神经母细胞瘤 581
24.8.13 精原细胞瘤 581
24.8.14 淋巴瘤和白血病 581
第25章 三维培养 583
25.1 细胞的相互作用和表型表达 583
25.1.1 细胞密度的作用 583
25.1.2 相互作用 584
25.1.3 模型的选择 584
25.2 器官培养 586
25.2.1 气体和营养物质的交换 586
25.2.2 结构的完整性 586
25.2.3 生长与分化 587
25.2.4 器官培养的限制 587
25.2.5 器官培养的类型 587
25.3 组织型培养 589
25.3.1 凝胶和海绵技术 589
25.3.2 中空纤维 590
25.3.3 球体 590
25.3.4 转动室系统 593
25.3.5 藻酸盐活细胞固定术 594
25.3.6 滤膜培养皿 594
25.3.7 神经聚集物的培养 597
25.4 器官型培养 599
25.4.1 组织等同物 599
25.4.2 组织工程 599
25.5 三维构建物中细胞的成像 601
第26章 规模与自动化 602
26.1 悬浮规模培养 602
26.1.1 连续培养 605
26.1.2 规模和复杂性 606
26.1.3 搅匀和换气 608
26.2 单层规模培养 610
26.2.1 多表面扩增器 610
26.2.2 旋转培养 613
26.2.3 微载体 615
26.2.4 巨型微载体 617
26.2.5 灌流式单层培养 619
26.3 程序控制 620
26.4 自动化 621
26.4.1 机器人细胞培养 621
26.4.2 高产量检测 622
第27章 特殊技术 624
27.1 淋巴细胞的制备 624
27.1.1 隔离的密度 624
27.1.2 淋巴母细胞的转化 625
27.2 放射自显影术 626
27.3 间隔性记录 632
27.4 细胞同步化 634
27.4.1 细胞分离 634
27.4.2 阻断 635
27.5 冷血动物细胞的培养 635
27.5.1 鱼细胞 636
27.5.2 昆虫细胞 636
27.6 体细胞融合 637
27.6.1 细胞杂交 637
27.6.2 移核实验 640
27.7 单克隆抗体的制备 640
第28章 培训纲要 646
28.1 目的 646
28.2 实验制备及操作技巧 647
28.3 基本的细胞培养技术 660
28.4 高阶练习 682
28.5 特殊练习 697
第29章 问题与对策 698
29.1 细胞异常形态 698
29.2 细胞生长缓慢 699
29.2.1 仅限于自己细胞出了问题 699
29.2.2 其他人也遇到同样的问题 699
29.3 培养基 700
29.3.1 试剂配方、准备和存储 700
29.3.2 不稳定试剂 701
29.3.3 配制培养基各种成分的纯度 702
29.4 基质和容器 703
29.5 微生物污染 703
29.5.1 仅限于单个实验者的问题 704
29.5.2 普遍问题 705
29.5.3 室内供气和层流净化工作台 706
29.5.4 特定污染 706
29.6 化学污染 707
29.6.1 玻璃器皿 707
29.6.2 移液管 707
29.6.3 水的纯化 707
29.6.4 低温冻存 707
29.6.5 粉末或气溶胶 708
29.7 原代培养 708
29.7.1 原代培养的存活率低 708
29.7.2 选择细胞错误 709
29.7.3 污染 709
29.8 分化 710
29.9 饲养层 710
29.9.1 常规单层培养 710
29.9.2 克隆培养 710
29.10 传代 711
29.10.1 收获率低或生长缓慢 711
29.10.2 生长不均匀 711
29.11 克隆 712
29.11.1 培养皿形成的克隆数过低 712
29.11.2 培养皿形成的克隆数太多 713
29.11.3 非随机分布 713
29.12 交叉污染和错误标记 713
29.13 冻存 714
29.13.1 复苏时存活率低 714
29.13.2 冻存后细胞形态发生变化 714
29.13.3 冻存细胞丢失 715
29.14 细胞计数 715
29.14.1 血细胞计数板 715
29.14.2 使用电阻抗法电子计数仪 715
第30章 结语 717
附录Ⅰ 计算配制及试剂制备 719
附录II 设备及材料来源 733
附录III 供应商和其他资源 763
附录IV 术语 779
附录V 交叉污染或鉴定有误的细胞系 789
附录VI 一般教材与相关期刊 809
参考文献 811
索引 883
^ 收 起
前言与致谢
缩略语
图片目录
彩版目录
方案目录
第1章 绪论 1
1.1 历史背景 1
1.2 组织培养的优点 7
1.2.1 环境控制 7
1.2.2 样品的特征和均一性 8
1.2.3 经济、规模和机械化 8
1.2.4 体内环境的体外模拟 8
1.3 局限性 9
1.3.1 专业技能 9
1.3.2 量的问题 9
1.3.3 去分化和选择 10
1.3.4 细胞的起源 10
1.3.5 不稳定性 10
1.4 体外的主要差异 10
1.5 组织培养的类型 11
第2章 培养细胞的生物学 14
2.1 培养细胞的环境 14
2.2 细胞黏附 14
2.2.1 细胞黏附分子 15
2.2.2 细胞间连接 16
2.2.3 细胞外基质 16
2.2.4 细胞骨架 18
2.2.5 细胞迁移 18
2.3 细胞增殖 18
2.3.1 细胞周期 18
2.3.2 细胞增殖的调控 19
2.4 细胞分化 20
2.4.1 细胞分化的维持 21
2.4.2 细胞去分化 21
2.5 细胞信号传递 24
2.6 能量代谢 25
2.7 培养细胞的起源 26
2.7.1 培养的开始 26
2.7.2 细胞系的演化 27
2.7.3 细胞的衰老 28
2.7.4 连续细胞系的转化与形成 28
第3章 实验室设计、布局及设备 30
3.1 布局、规划和服务设施 30
3.1.1 要求 32
3.1.2 服务设施 34
3.1.3 通风装置 35
3.2 布局 35
3.2.1 无菌操作区 36
3.2.2 层流原理 36
3.2.3 工作台 36
3.2.4 检疫室和防范室 36
3.2.5 培养 37
3.2.6 准备区 40
3.2.7 储存 41
第4章 设备及材料 44
4.1 组织培养实验室的要求 44
4.2 无菌区 46
4.2.1 洁净台 46
4.2.2 手推车 48
4.2.3 无菌液操作——移液和分装 49
4.2.4 倒置显微镜 53
4.2.5 CCD摄像机和监视器 54
4.2.6 解剖显微镜 54
4.2.7 离心机 54
4.2.8 细胞计数 55
4.3 细胞孵育和培养 55
4.3.1 恒温箱 55
4.3.2 湿式CO2培养箱 56
4.3.3 温度记录仪 57
4.3.4 滚动架 57
4.3.5 磁力搅拌器 58
4.3.6 培养器皿 58
4.4 实验准备和杀菌 58
4.4.1 清洗 58
4.4.2 培养基和试剂的制备 59
4.4.3 杀菌 61
4.5 储存 63
4.5.1 消耗品 63
4.5.2 冰箱和冷冻箱 63
4.5.3 冷藏器 64
4.5.4 可控速率冷冻箱 64
4.6 附属设备 64
4.6.1 计算机和网络 64
4.6.2 普通正置显微镜 65
4.6.3 低温冷冻箱 65
4.6.4 共聚焦显微镜 65
4.6.5 PCR循环仪 65
4.7 专用设备 66
4.7.1 显微注射装置 66
4.7.2 集落计数器 66
4.7.3 可离心淘洗机 66
4.7.4 流式细胞仪 66
第5章 无菌技术 67
5.1 无菌技术的目标 67
5.1.1 微生物污染的风险 67
5.1.2 无菌的维持 67
5.2 创造无菌环境的各种因素 68
5.2.1 层流 69
5.2.2 安静的工作区域 71
5.2.3 工作面 71
5.2.4 个人卫生 73
5.2.5 试剂和培养基 73
5.2.6 培养物 73
5.3 灭菌操作 73
5.3.1 擦拭 73
5.3.2 加盖 74
5.3.3 灼烧 74
5.3.4 试剂瓶和培养瓶的操作 74
5.3.5 移液 75
5.3.6 液体倾倒 75
5.4 标准操作程序 76
5.5 仪器和设备 82
5.5.1 培养箱 82
5.5.2 盒装培养物 82
5.5.3 充入CO2气体 82
第6章 安全性、生物伦理及验证 83
6.1 实验室安全 83
6.2 危险性评估 83
6.3 标准操作程序 85
6.4 安全规则 85
6.5 常规安全 86
6.5.1 操作者 87
6.5.2 设备 87
6.5.3 玻璃器皿和锐利物品 87
6.5.4 化学毒性 88
6.5.5 气体 89
6.5.6 液氮 89
6.5.7 灼烧 90
6.6 火 90
6.7 放射性 91
6.7.1 摄入 91
6.7.2 放射性废弃物的处理 91
6.7.3 标记的试剂 91
6.7.4 高能源 91
6.8 生物危害性 92
6.8.1 生物防范水平 92
6.8.2 微生物学安全通风橱（MSC） 94
6.8.3 人体活检材料 96
6.8.4 遗传操作 97
6.8.5 生物危害性废弃物处理 97
6.8.6 熏蒸 97
6.9 生物伦理 98
6.9.1 动物组织 98
6.9.2 人体组织材料 98
6.10 质量保证 99
6.10.1 操作程序 100
6.10.2 质量控制（QC） 100
6.11 验证 100
6.11.1 鉴定 100
6.11.2 来源 101
6.11.3 污染 101
第7章 培养器皿和附着物 102
7.1 附着物 102
7.1.1 细胞的附着和生长 102
7.1.2 常见的附着材料 102
7.1.3 其他替代性附着物 103
7.2 表面处理 103
7.2.1 基质覆盖 103
7.2.2 饲养层 105
7.2.3 非黏附性附着面 106
7.3 培养器皿的选择 107
7.3.1 细胞产量 107
7.3.2 悬浮培养 109
7.3.3 通风 110
7.3.4 取样和分析 111
7.3.5 不均匀生长 112
7.3.6 价格 112
7.4 特殊系统 112
7.4.1 渗透性支持物 112
7.4.2 三维基质 113
第8章 成分明确培养基及补充物 115
8.1 培养基的发展史 115
8.2 物理化学特征 115
8.2.1 pH 115
8.2.2 CO2和碳酸盐 116
8.2.3 缓冲作用 123
8.2.4 氧气 123
8.2.5 渗透压 124
8.2.6 温度 124
8.2.7 黏滞度 125
8.2.8 表面张力和成泡性 125
8.3 平衡盐溶液 126
8.4 完全培养基 126
8.4.1 氨基酸 127
8.4.2 维生素 127
8.4.3 盐类 127
8.4.4 葡萄糖 128
8.4.5 有机补充物 128
8.4.6 激素和生长因子 128
8.4.7 抗生素 128
8.5 血清 129
8.5.1 蛋白质 130
8.5.2 生长因子 131
8.5.3 激素 131
8.5.4 营养物及代谢物 132
8.5.5 脂类 132
8.5.6 矿物质 132
8.5.7 抑制物 132
8.6 培养基和血清的选择 132
8.6.1 批次预约 134
8.6.2 血清的测试 135
8.6.3 热灭活 135
8.7 其他添加物 136
8.7.1 氨基酸水解物 136
8.7.2 胚胎浸出液 136
8.7.3 适应性培养基 136
第9章 无血清培养基 137
9.1 血清的缺点 145
9.2 无血清培养基的优点 146
9.2.1 标准培养基的定义 146
9.2.2 选择性培养基 146
9.2.3 调节细胞增殖与分化 146
9.3 无血清培养基的缺点 146
9.4 血清的替代 147
9.4.1 无血清培养基的商业供应 147
9.4.2 血清替代物 147
9.4.3 无血清传代培养 148
9.4.4 激素 149
9.4.5 生长因子 149
9.4.6 血清中的营养物质 154
9.4.7 蛋白质和多聚胺 154
9.4.8 黏滞度 154
9.5 无血清培养基的选择 154
9.5.1 细胞或产物特异性 154
9.5.2 适应无血清培养基 157
9.6 无血清培养基的研发 157
9.7 无血清培养基的制备 157
9.8 无动物蛋白培养基 158
9.9 小结 158
第10章 准备与灭菌 159
10.1 准备试剂与用品 159
10.2 设备与液体的灭菌 159
10.3 设备 162
10.3.1 玻璃器皿 162
10.3.2 玻璃移液管 165
10.3.3 螺口盖 168
10.3.4 清洁剂的选择 170
10.3.5 种类繁杂的设备 170
10.3.6 可重复使用的灭菌过滤器 171
10.4 试剂与培养基 173
10.4.1 水 173
10.4.2 纯水器的维护 175
10.4.3 平衡盐溶液 175
10.4.4 培养基的配制与灭菌 177
10.4.5 干粉培养基 180
10.4.6 特制培养基 182
10.5 培养基的灭菌 183
10.5.1 可高压灭菌的培养基 183
10.5.2 除菌过滤 183
10.5.3 血清 192
10.5.4 其他试剂的准备与灭菌 195
10.6 培养基的质控、检测和储存 196
10.6.1 质量控制 196
10.6.2 无菌检测 196
10.6.3 培养物检测 197
10.6.4 储存 197
第11章 原代培养 199
11.1 原代培养入门 199
11.1.1 用于解离组织的酶 199
11.1.2 解离过程的共同特点 200
11.2 组织分离 200
11.2.1 小鼠胚胎 200
11.2.2 鸡胚 204
11.2.3 人体活检材料 206
11.3 原代培养的类型 207
11.3.1 原代外植 207
11.3.2 酶的解离作用 210
11.3.3 温胰蛋白酶消化 210
11.3.4 低温预处理的胰蛋白酶消化 213
11.3.5 鸡胚器官原基 216
11.3.6 其他酶解过程 219
11.3.7 胶原酶 220
11.3.8 机械法解离 222
11.3.9 分离活细胞 224
11.3.10 原代培养小结 225
11.3.11 原始记录 225
第12章 传代培养和细胞系 227
12.1 传代培养和扩增 227
12.1.1 交叉污染和鉴定错误 229
12.1.2 支原体污染 231
12.1.3 术语定义 231
12.1.4 细胞系的命名 232
12.1.5 培养物的年龄 233
12.2 选择细胞系 233
12.3 常规培养 234
12.3.1 细胞形态的意义 234
12.3.2 培养基的更换 235
12.3.3 标准的换液方案 236
12.4 传代 238
12.4.1 传代标准 240
12.4.2 单层生长细胞典型的传代方案 241
12.4.3 生长周期和传代比率 243
12.4.4 传代时的细胞浓度 245
12.4.5 悬浮培养细胞的扩增 245
12.4.6 悬浮生长细胞的传代 246
12.4.7 培养条件的标准化 248
12.4.8 抗生素的使用 248
12.4.9 培养记录 249
第13章 克隆培养及筛选 251
13.1 克隆培养 251
13.2 贴壁率的刺激 255
13.2.1 促进克隆生长的条件 255
13.2.2 条件培养基 256
13.2.3 饲养层细胞 257
13.3 悬浮克隆培养 259
13.4 细胞克隆的分离 264
13.4.1 单层贴壁细胞克隆的其他分离技术 267
13.4.2 悬浮细胞克隆 268
13.5 复制性培养 269
13.6 选择性抑制剂 269
13.7 遗传变异细胞的筛选 270
13.8 细胞与基质的相互作用 272
13.8.1 选择性黏附 272
13.8.2 选择性脱壁 272
13.8.3 基质性质 273
13.8.4 选择性饲养层 273
13.8.5 半固体培养基选择 273
第14章 细胞分离 275
14.1 细胞密度及等密度沉降法 275
14.2 细胞体积与沉降速率 279
14.2.1 单位重力沉降 279
14.2.2 离心淘洗分离技术 279
14.3 以抗体为基础的分离技术 280
14.3.1 免疫盘化法 281
14.3.2 免疫磁珠分选 281
14.4 荧光活化的细胞分选法 284
14.5 其他分离技术 285
14.6 初学者如何进行细胞分离实践 286
第15章 细胞鉴定 287
15.1 鉴定的需求 287
15.2 真实性验证 287
15.3 保存记录和身世 288
15.4 鉴定指标 288
15.4.1 种属鉴定 289
15.4.2 谱系或组织标记 289
15.4.3 独特标记物 291
15.4.4 转化 291
15.5 细胞形态学 291
15.5.1 显微镜使用 295
15.5.2 染色 297
15.5.3 细胞学检查所用培养器皿：单层
培养 299
15.5.4 悬浮细胞细胞学检查标本的制备 299
15.5.5 光学显微照相技术 302
15.6 共聚焦显微镜 303
15.7 染色体分析 303
15.7.1 染色体显带技术 306
15.7.2 染色体分析 307
15.8 DNA含量 308
15.8.1 DNA杂交 308
15.8.2 DNA指纹技术 308
15.8.3 DNA绘谱 309
15.9 RNA和蛋白质 314
15.10 酶活性 314
15.10.1 同工酶 314
15.10.2 利用Authentikit进行同工酶电泳 315
15.11 抗原标记 318
15.11.1 免疫染色 320
15.11.2 免疫分析 321
15.12 分化 322
第16章 分化 323
16.1 体内表型的表达 323
16.1.1 去分化 323
16.1.2 细胞谱系选择 324
16.2 分化阶段 324
16.3 增殖和分化 324
16.4 定向和细胞谱系 325
16.5 干细胞可塑性 326
16.6 分化标记物 327
16.7 诱导分化 328
16.7.1 细胞相互作用 328
16.7.2 全身性因子 330
16.7.3 细胞-基质相互作用 333
16.7.4 极性和细胞形状 334
16.7.5 氧张力 334
16.8 分化和恶性 334
16.9 应用 334
第17章 转化和永生化 336
17.1 在细胞系鉴定中的作用 337
17.2 什么是转化 337
17.3 遗传不稳定性和异质性 338
17.3.1 遗传不稳定性 338
17.3.2 染色体畸变 339
17.4 永生化 339
17.4.1 衰老的控制 340
17.4.2 病毒基因致永生化 341
17.4.3 人成纤维细胞的永生化 342
17.4.4 端粒酶诱导的永生化 345
17.4.5 淋巴细胞永生化 350
17.4.6 转基因鼠 350
17.5 生长控制异常 350
17.5.1 停泊不依赖性 350
17.5.2 接触抑制 351
17.5.3 血清依赖 353
17.5.4 癌基因 354
17.6 致瘤性 354
17.6.1 恶性化 354
17.6.2 肿瘤移植 355
17.6.3 侵袭力 355
17.6.4 血管发生 356
17.6.5 纤溶酶原活化因子 359
第18章 污染 361
18.1 污染的来源 361
18.1.1 操作者的技术 363
18.1.2 环境 364
18.1.3 层流通风橱的使用和维护 364
18.1.4 湿度恒温箱 364
18.1.5 冷藏库 365
18.1.6 无菌材料 366
18.1.7 引入的细胞系和活组织 366
18.1.8 隔离 366
18.2 微生物污染的种类 366
18.3 污染物的监控 366
18.3.1 可见的微生物污染 367
18.3.2 支原体 368
18.3.3 支原体的荧光染色 369
18.3.4 PCR法检测支原体 370
18.3.5 检测支原体的替代方法 374
18.3.6 支原体检测服务 375
18.3.7 病毒污染 375
18.4 污染培养物的处理 375
18.5 污染的去除 376
18.5.1 细菌、真菌和酵母菌 376
18.5.2 支原体的消除 377
18.5.3 清除病毒污染 378
18.5.4 顽固污染 379
18.6 交叉污染 379
18.7 结论 380
第19章 冻存 381
19.1 冻存的意义 381
19.2 冻存前注意事项 381
19.2.1 鉴定 382
19.2.2 何时冻存 382
19.3 冻存细则 382
19.3.1 细胞冻存的理论背景 382
19.3.2 细胞浓度 382
19.3.3 冻存液 383
19.3.4 冷却速度 383
19.3.5 安瓿 386
19.3.6 低温冰箱 386
19.3.7 培养细胞的冻存 389
19.3.8 冻存记录 391
19.3.9 安瓿的解冻 392
19.3.10 培养瓶冻存 394
19.4 玻璃化保存 394
19.4.1 hES细胞的冻存 394
19.4.2 hES细胞解冻 397
19.5 冻存库的设计和监控 398
19.5.1 冻存管理 399
19.5.2 细胞库存的连续更换 399
19.6 细胞库 400
19.7 细胞的运输 400
19.7.1 冻存安瓿 401
19.7.2 活细胞 401
第20章 定量 403
20.1 细胞计数 403
20.1.1 血细胞计数器 404
20.1.2 电子计数 407
20.1.3 染色的单层细胞 411
20.1.4 流式细胞仪 411
20.2 细胞质量 413
20.3 DNA含量 413
20.4 蛋白质 414
20.4.1 样品的溶解性 414
20.4.2 Bradford分析 414
20.5 合成速率 415
20.5.1 DNA合成 415
20.5.2 蛋白质合成 417
20.6 准备样品用于酶分析和免疫分析 418
20.7 细胞计数 419
20.7.1 原位标记 419
20.7.2 流式细胞术 419
20.8 重复取样 419
20.8.1 数据获得 419
20.8.2 数据分析 420
20.9 细胞增殖 420
20.9.1 实验设计 421
20.9.2 生长周期 421
20.9.3 单层细胞生长曲线的分析 425
20.9.4 培养基体积，细胞浓度和细胞密度 427
20.9.5 悬浮培养 428
20.9.6 生长周期的各个阶段 429
20.9.7 生长曲线的衍生物 430
20.10 贴壁效率 431
20.10.1 集落形成分析 433
20.10.2 自动集落计数 434
20.11 标记指数 434
20.11.1 生长分数 437
20.11.2 有丝分裂指数 438
20.11.3 分裂指数 438
20.12 细胞周期时间 438
20.13 细胞迁移 438
第21章 细胞毒性 439
21.1 活性、毒性和存活 439
21.2 体外局限性 440
21.2.1 药物代谢动力学 440
21.2.2 新陈代谢 440
21.2.3 组织和全身反应 440
21.3 分析的性质 440
21.3.1 生存力 441
21.3.2 存活 443
21.3.3 细胞增殖测定 448
21.3.4 代谢性细胞毒性测定 448
21.3.5 微滴定实验 449
21.3.6 微滴定与克隆存活的比较 453
21.3.7 药物的相互作用 454
21.4 细胞毒性实验的应用 454
21.4.1 抗癌药物筛选 454
21.4.2 肿瘤药物的前瞻性实验 454
21.4.3 药物学实验 455
21.5 基因毒性 455
21.5.1 姐妹染色单体交换的诱变实验 455
21.5.2 致癌性 458
21.6 炎症反应 459
第22章 特殊类型细胞的培养 461
22.1 特殊细胞培养技术 463
22.2 上皮细胞 463
22.2.1 表皮 464
22.2.2 角膜 469
22.2.3 乳腺 471
22.2.4 子宫颈 473
22.2.5 胃肠道 476
22.2.6 肝 478
22.2.7 原代肝细胞培养 478
22.2.8 人肝癌细胞系HepaRG 481
22.2.9 胰 483
22.2.10 肾 485
22.2.11 气管和支气管上皮 487
22.2.12 口腔上皮 489
22.2.13 前列腺 490
22.3 间充质细胞 492
22.3.1 结缔组织 493
22.3.2 脂肪组织 493
22.3.3 肌 495
22.3.4 软骨 501
22.3.5 骨 504
22.3.6 内皮细胞 506
22.4 神经外胚层细胞 512
22.4.1 神经细胞 512
22.4.2 神经胶质细胞 513
22.4.3 内分泌细胞 519
22.4.4 黑素细胞 520
22.5 造血细胞 523
22.6 生殖腺 524
22.6.1 卵巢 524
22.6.2 睾丸 524
第23章 干细胞、生殖细胞和羊水细胞 525
23.1 干细胞 525
23.1.1 胚胎干细胞 525
23.1.2 小鼠胚胎干细胞的诱导 525
23.1.3 小鼠胚胎干细胞的传代培养和扩增 530
23.1.4 人胚胎干细胞的原代培养 532
23.1.5 hES细胞的传代 534
23.1.6 鱼胚胎来源的多能干细胞 535
23.2 生殖细胞 539
23.3 胚外细胞 540
23.3.1 羊水细胞的培养 540
23.3.2 从新生儿或青年来源的细胞 544
23.3.3 成人来源的多能干细胞 544
23.3.4 人骨髓来源间充质干细胞 545
23.3.5 诱导多潜能干细胞 548
23.3.6 小鼠骨髓长期培养 552
23.3.7 人原始造血细胞长期培养 554
23.3.8 造血细胞集落形成分析 559
第24章 肿瘤细胞培养 562
24.1 肿瘤细胞培养中的问题 562
24.2 取材 563
24.2.1 代表性细胞的选择 563
24.2.2 冷冻组织保存 564
24.3 分离 564
24.4 原代培养 565
24.5 肿瘤细胞的选择培养 566
24.5.1 选择培养基 566
24.5.2 汇合饲养层 566
24.5.3 悬浮克隆 569
24.5.4 异种移植 569
24.6 细胞系的建立 570
24.6.1 原代肿瘤培养物的传代 570
24.6.2 连续细胞系 570
24.7 肿瘤细胞培养物的特征 571
24.7.1 肿瘤细胞的异质性 571
24.7.2 组织型培养 572
24.8 特殊类型肿瘤 572
24.8.1 乳腺 572
24.8.2 肺 574
24.8.3 胃 575
24.8.4 结肠 575
24.8.5 胰腺 578
24.8.6 卵巢 578
24.8.7 前列腺 578
24.8.8 膀胱 579
24.8.9 皮肤 579
24.8.10 子宫颈 580
24.8.11 胶质细胞瘤 580
24.8.12 神经母细胞瘤 581
24.8.13 精原细胞瘤 581
24.8.14 淋巴瘤和白血病 581
第25章 三维培养 583
25.1 细胞的相互作用和表型表达 583
25.1.1 细胞密度的作用 583
25.1.2 相互作用 584
25.1.3 模型的选择 584
25.2 器官培养 586
25.2.1 气体和营养物质的交换 586
25.2.2 结构的完整性 586
25.2.3 生长与分化 587
25.2.4 器官培养的限制 587
25.2.5 器官培养的类型 587
25.3 组织型培养 589
25.3.1 凝胶和海绵技术 589
25.3.2 中空纤维 590
25.3.3 球体 590
25.3.4 转动室系统 593
25.3.5 藻酸盐活细胞固定术 594
25.3.6 滤膜培养皿 594
25.3.7 神经聚集物的培养 597
25.4 器官型培养 599
25.4.1 组织等同物 599
25.4.2 组织工程 599
25.5 三维构建物中细胞的成像 601
第26章 规模与自动化 602
26.1 悬浮规模培养 602
26.1.1 连续培养 605
26.1.2 规模和复杂性 606
26.1.3 搅匀和换气 608
26.2 单层规模培养 610
26.2.1 多表面扩增器 610
26.2.2 旋转培养 613
26.2.3 微载体 615
26.2.4 巨型微载体 617
26.2.5 灌流式单层培养 619
26.3 程序控制 620
26.4 自动化 621
26.4.1 机器人细胞培养 621
26.4.2 高产量检测 622
第27章 特殊技术 624
27.1 淋巴细胞的制备 624
27.1.1 隔离的密度 624
27.1.2 淋巴母细胞的转化 625
27.2 放射自显影术 626
27.3 间隔性记录 632
27.4 细胞同步化 634
27.4.1 细胞分离 634
27.4.2 阻断 635
27.5 冷血动物细胞的培养 635
27.5.1 鱼细胞 636
27.5.2 昆虫细胞 636
27.6 体细胞融合 637
27.6.1 细胞杂交 637
27.6.2 移核实验 640
27.7 单克隆抗体的制备 640
第28章 培训纲要 646
28.1 目的 646
28.2 实验制备及操作技巧 647
28.3 基本的细胞培养技术 660
28.4 高阶练习 682
28.5 特殊练习 697
第29章 问题与对策 698
29.1 细胞异常形态 698
29.2 细胞生长缓慢 699
29.2.1 仅限于自己细胞出了问题 699
29.2.2 其他人也遇到同样的问题 699
29.3 培养基 700
29.3.1 试剂配方、准备和存储 700
29.3.2 不稳定试剂 701
29.3.3 配制培养基各种成分的纯度 702
29.4 基质和容器 703
29.5 微生物污染 703
29.5.1 仅限于单个实验者的问题 704
29.5.2 普遍问题 705
29.5.3 室内供气和层流净化工作台 706
29.5.4 特定污染 706
29.6 化学污染 707
29.6.1 玻璃器皿 707
29.6.2 移液管 707
29.6.3 水的纯化 707
29.6.4 低温冻存 707
29.6.5 粉末或气溶胶 708
29.7 原代培养 708
29.7.1 原代培养的存活率低 708
29.7.2 选择细胞错误 709
29.7.3 污染 709
29.8 分化 710
29.9 饲养层 710
29.9.1 常规单层培养 710
29.9.2 克隆培养 710
29.10 传代 711
29.10.1 收获率低或生长缓慢 711
29.10.2 生长不均匀 711
29.11 克隆 712
29.11.1 培养皿形成的克隆数过低 712
29.11.2 培养皿形成的克隆数太多 713
29.11.3 非随机分布 713
29.12 交叉污染和错误标记 713
29.13 冻存 714
29.13.1 复苏时存活率低 714
29.13.2 冻存后细胞形态发生变化 714
29.13.3 冻存细胞丢失 715
29.14 细胞计数 715
29.14.1 血细胞计数板 715
29.14.2 使用电阻抗法电子计数仪 715
第30章 结语 717
附录Ⅰ 计算配制及试剂制备 719
附录II 设备及材料来源 733
附录III 供应商和其他资源 763
附录IV 术语 779
附录V 交叉污染或鉴定有误的细胞系 789
附录VI 一般教材与相关期刊 809
参考文献 811
索引 883
^ 收 起
《动物细胞培养——基本技术和特殊应用指南》历来被看作该领域的经典与领衔工作。本版除保留前五版的基本内容（如原代培养、细胞系、传代、分化、细胞特化、污染、无菌技术、细胞毒性、冷冻保存、实验室布局与设备培训纲要等）之外，为反映组织工程与再生医学发展的需要，特地增加了“干细胞”一章，以及某些新的特殊技术。内容新颖，程序可靠。极具参考与模仿价值。
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